有用处理RNase污染问题使RNA完好无损!
从源头上防止RNase污染十分必要,一方面要严控外源性RNase的污染,另一方面要最大极限地按捺内源性的RNase。
RNase(Ribonuclease,核糖核酸酶)是一类可以催化RNA降解为小分子RNA的核酸酶,广泛存在于真核、原核生物的一切细胞和安排中,一般有极强活性,RNA样本中微量的RNase污染足以导致其彻底降解。试验室中RNase污染的大多数来自有:
RNase的无处不在,使得试验进程中,难以保存RNA样本的完好性,导致试验失利或影响RNA剖析的成果。因而,从源头上防止RNase污染十分必要,一方面要严控外源性RNase的污染,另一方面要最大极限地按捺内源性的RNase。
在试验进程中戴手套可防止源自人手的RNase污染;接触皮肤、门把手及一般物体外表后替换手套;
RNA操作专用的移液枪;运用RNase-free的枪头和离心管;运用RNase-free的化合物与试剂;
远离/遮盖通风孔或敞开窗口,走动较少的区域作为RNase-free区域;
安排取样后若不直接提取RNA,要及时用液氮敏捷冷冻存于-80°C环境,并尽早进行试验,这样可使RNA的降解到达最少。
在细胞裂解液中参加RNase 按捺剂(RNase inhibitor),使破碎细胞与灭活RNase 同步进行,最大极限地下降细胞破碎进程中所开释的RNase的活性。
RNase按捺剂(RNase inhibitor,简称RNasin)是存在于人的胎盘中的一种特异性RNase按捺剂,可以特异地与RNase以非共价键结合构成复合体,形成RNase失活,然后维护RNA的完好度。现在,RNasin大多数都用在cDNA组成,体外转录,体外翻译,以及mRNA-protein复合物别离纯化等进程中维护RNA不被降解,还可用于特定RNase活性的判定等。